นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

อั้ม
Ico64
ความเคลื่อนไหวล่าสุด
  • ไม่มี
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 0

อ่าน: 8369
ความเห็น: 6

Realtime-PCR (1)

Realtime-PCR ต่างกับ PCR อย่างไร

Realtime-PCR (1)

คำถามจากผู้มาขอใช้บริการ

Realtime-PCR ต่างกับ PCR อย่างไร

คำตอบ

1. PCR และ Realtime-PCR ใช้ในการตรวจและเพิ่มจำนวน DNA และ RNA

เดิมการตรวจชิ้น PCR product จะตรวจที่ end point ของปฏิกิริยา

แต่สำหรับ Realtime-PCR สามารถตรวจได้ขณะที่กำลังเกิดปฏิกิริยาได้ และสามารถเห็น kinetics ของปฏิกิริยา

2. PCR ต้องตรวจสอบด้วย Agarose gel แต่สำหรับ Realtime-PCR ด้วยสาร Fluorescent ที่ใช้ในปฏิกิริยาจึงทำให้สามารถเห็น kinetics ของปฏิกิริยาได้ขณะกำลังเกิด PCR amplification

3. PCR เวลาที่ใช้โดยส่วนใหญ่ประมาณ 3 ชม. ส่วน Realtime-PCR เวลาที่ใช้โดยส่วนใหญ่ประมาณ 45 นาทีเท่านั้น

4. สารเคมีที่ใช้สำหรับ Realtime-PCR ใช้สาร Fluorescent ซึ่งสามารถ detect ได้ด้วย detector

ข้อมูลจาก http://www.appliedbiosystems.com/support/tutorials/pdf/rtpcr_vs_tradpcr.pdf

Realtime-PCR Evolution

 Realtime-PCR evolution

 

หมวดหมู่บันทึก: เรื่องทั่วไป
สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ Copyright
สร้าง: 20 สิงหาคม 2551 16:57 แก้ไข: 21 มิถุนายน 2552 14:39 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

  • เพิ่มเติมอีกนิดนะครับว่า

PCR นิยมทำเพื่อหาแบบคุณภาพ (quanlitative)คือหาดูว่ามี gene หรือสายดีเอ็นเอที่เราสนใจอยู่หรือไม่ ดูว่ามีอยู่หรือเปล่า จบเพียงแค่นั้น แม้ว่าการย้อมเจลจะตอบได้ว่ามีเยอะหรือน้อยขึ้นกับการติดสีเข้มหรือจาง แต่ในทางปฏิบัติวิธีนี้หยาบเกินไปที่จะใช้ในการบอกปริมาณครับ ส่วน real time PCR นิยมทำในกรณีของการหาปริมาณ (quantitative) คือหาดูว่ามียีนหรือสายดีเอ็นเอที่เราสนใจอยู่หรือไม่ ถ้ามีแล้วมีมากแค่ไหน เพราะฉะนั้นเมื่อตอบได้ว่ามีมากแค่ไหน ก็ต้องใส่ standard หรือปริมาณยีนส์ที่เรารู้ค่าเข้าไปด้วยให้ plot เป็น standard curve สำหรับการเอาตัวอย่างของเรามาเปรียบเทียบและใช้บอกปริมาณของตัวอย่างของเราว่ามีอยู่มากน้อยเพียงใด

  • นอกจากนั้น ในการทำ PCR เมื่อทำเสร็จ ได้ PCR product แล้ว ถ้าเป็นการทำเพื่อการวิจัย จะมีคำถามตามมาอีกว่าแล้วเชื่อได้อย่างไรว่า สาย PCR product ที่เราทำออกมาได้นั้น เป็นของจริง ไม่ใช่ของเก๊ ที่กระบวนการของเราทำมั่วๆออกมา (non specific band) ดังนั้นหลังกระบวนการนี้ ก็ต้องทำ RFLP ครับ คือหาเอ็นไซม์ตัดจำเพาะมาตัด ถ้าตัดได้เราก็บอกว่าเป็น PCR product ของเราจริงครับ ถ้าตัดไม่ได้ก็แสดงว่าเป็นของเก๊ ซึ่งในขั้นตอนของการยืนยันตรงนี้ ในการทำ realtime PCR ใช้วิธีการที่แตกต่างครับ คือใช้การอ่าน melting curve เพื่อหา Tm หรือไม่ก็ใช้ probe เข้ามาจับคร้าบผม
Ico48
ธีรภัทร [IP: 202.28.21.4]
06 พฤศจิกายน 2551 10:37
#37750

อยากทราบว่า LightCycler system คืออะไรครับ

 และอยากให้อธิบายรายละเอียดเกี่ยวกับขั้นตอน Real Time Detection  ให้หน่อยอ่ะครับ

 

ขอบคุณครับ

Ico48
dogdak [IP: 202.28.25.182]
17 มกราคม 2552 16:23
#40185

LightCycler (Roche Molecular Biochemicals) นั้นเป็นเครื่องมือที่สามารถทำ PCR ได้ในปริมาตรน้อยมากใน glass capillary tubes ที่ถูกเสียบเข้าตามช่องใน carousel จำนวน 32 ช่อง ที่มี air stream ร้อนและเย็นผ่าน ทำให้เวลาที่ใช้ต่อหนึ่ง cycle ลดลงเหลือแค่เพียง 10 วินาที แต่ละรอบของ PCR สัญญาณ Fluorescence จะถูกอ่านจาก carousel ผ่าน light-emitting diode และ มี photo (detection) diode จำนวน 3 ตัว ทำให้สามารถอ่าน Fluorescent probe ที่ให้สัญญาณคลื่นที่ต่างกันได้ เวลาที่ใช้ในการทำ PCR จะน้อยกว่า ABI 7700 3-5 เท่า

Ico48
sumalin [IP: 161.200.210.177]
26 September 2010 20:40
#60453

ขอบคุณมากๆสำหรับความรู้เรื่อง PCR นะคะ

Ico48
ดีค่ะ [IP: 223.206.181.247]
11 กุมภาพันธ์ 2554 07:38
#63583

อยากทราบว่าการทำ Realtime PCR โดยใช้ Sybr Green มันก็สามารถบอกปริมาณได้แล้วแต่ทำไมเขาใช้ GFP (green fluorescence protein )  มาร่วมด้วยอะคะ  อยากทราบว่าใช้ GFP มาร่วมเพื่ออะไรในการทำ Realtime PCR คือว่าไปอ่านเจอใน paper อะค่ะ ขอบคุณมากค่ะ 

ปล.  ขอคำตอบไวไวหน่อยนะคะ ขอบคุณค่ะ

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 3.238.190.82
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ