นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 5541
ความเห็น: 0

HPLC แบบ Analytical vs. Preparative

HPLC แบบ Analytical vs. Preparative

 

 

อย่างที่เคยบันทึกไว้เกี่ยวหลักการทำงานของ HPLC  คือ โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงใช้แยกสารเคมีภายใต้ความดันของเหลว เป็นเทคนิคการวิเคราะห์สารเชิงคุณภาพวิเคราะห์ (qualitative analysis) และปริมาณวิเคราะห์ (quantitative analysis) เลือกใช้เครื่องตรวจวัดที่เหมาะสม HPLC เป็นเทคนิคแยกสารผสมแบบใช้เครื่องสูบแรงดันสูง (high pressure pump) สูบตัวทำละลายซึ่งทำหน้าที่เป็นเฟสเคลื่อนที่ (mobile phase) พาสารตัวอย่างที่ถูกฉีดเข้าทางช่องฉีดสาร (injector) ผ่านอนุภาคที่เป็นเฟสอยู่กับที่ (stationary phase) ซึ่งบรรจุอยู่ในคอลัมน์ (column) สารผสมตัวอย่างจะเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์และถูกแยกออกมา ผ่านเข้าสู่เครื่องตรวจวัด (detector) ในเวลาที่ต่างกัน สัญญาณที่วัดได้จะอยู่ในรูปสัญญาณไฟฟ้าตามเวลาและปริมาณของสารแต่ละตัวที่ตรวจวัดได้ จากนั้นสัญญาณจะถูกส่งไปยังเครื่องบันทึกสัญญาณ เพื่อแสดงผลออกมาเป็นโครมาโทแกรม (chromatogram)

 

ซึ่งการแยกสารของ HPLC ทำให้สามารถแยกประเภทของ HPLC ออกได้ 2 ประเภท คือ

 

1) Analytical  HPLC  และ.   2) Preparative HPLC 

 

2 ชนิด นี้ มีวัตถุประสงค์การใช้งานที่แตกต่างกัน

 

 

ตัวอย่าง Analytical HPLC

 

ซึ่งที่ศูนย์เครื่องมือฯมีให้บริการคือ Analytical  HPLC   คือการแยกสารแบบทดสอบเชิงคุณภาพหรือปริมาณ

จะใช้ คอลัมน์ขนาดไม่ใหญ่มาก และ อัตราการไหลไม่เกิน 3 ml/min  และปริมาตรที่ใช้ฉีด (sample injection) ค่อนข้างน้อย ดังนั้นปริมาณสารที่ออกจาก Detector ด้าน out หลังจากที่ถูกแยกและตรวจวัดสัญญาณได้ก็จะมีปริมาณน้อยๆ และสารลงสู่ขวดรับ Waste ต่อไป เช่น หากเราต้องการทราบว่า มีปริมาณน้ำตาล กลูโคส ในน้ำผึ้ง หรือไม่และมีปริมาณเท่าไหร่ เราก็จะใช้ Analytical  HPLC การทดสอบโดยฉีดสารมาตรฐานเพื่อเปรียบเทียบค่าที่ได้

 

 

ตัวอย่าง Preparative HPLC

รูปจาก http://www.springerimages.com/Images/LifeSciences

 

 

ในขณะที่ Preparative HPLC คือการแยกสารแบบเก็บ Fraction ที่จะต้องมี Fraction collector รอรับสารแต่ละ พีค ที่ถูกแยกออกมา เพื่อนำสารที่ได้แต่ละ พีค แต่ละ Fraction ไปทำให้บริสุทธิ์ หรือทดสอบ activity ต่างๆต่อไป

เช่นมีสารสุนไพรชนิดหนึ่งนำมาสกัดได้เป็น  crude extract ซึ่ง crude extract คือ การสกัดอย่างหยาบๆ หมายความถึงการสกัดแบบไม่พีถีพิถันนัก จะใช้น้ำ หรือสารละลายอื่นก็ได้ แต่สารที่สกัดออกมาได้ไม่บริสุทธิ์มากมาย อาจมีอย่างอื่นเจือปนอยู่มากพอดู เป็นแบบการสกัดขั้นแรกๆ แล้วต้องการแยกสารใน crude extract นั้นให้บริสุทธิ์ เราก็จะใช้ Preparative HPLC ในการทดสอบเพื่อแยกสารออกมาเป็น แต่ Fraction เพราะแน่นอนว่าใน crude extract ต้องมีสารหลายๆชนิดผสมรวมกันอยู่ ซึ่ง คอลัมน์ที่ใช้แยกมีขนาดค่อนข้างใหญ่ อัตราการไหลค่อนข้างสูง  และปริมาตรที่ใช้ฉีด (sample injection) ค่อนข้างมาก ดังนั้น fraction ที่เก็ได้จะได้ปริมาณมากตามไปด้วย ทำให้ได้ปริมาณสารที่สามารถนำไปต่อยอดทำงานต่อได้

หมวดหมู่บันทึก: พัฒนางานประจำ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 05 มกราคม 2556 08:32 แก้ไข: 25 มกราคม 2556 15:56 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 ServiceMan, Ico24 iHum, และ 3 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

ไม่มีความเห็น

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 34.231.21.83
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ