นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 2830
ความเห็น: 2

การปรับค่า window RT กับ การสร้าง Calibration curve ด้วย HPLC

การปรับค่า window RT กับ การสร้าง Calibration curve ด้วย HPLC

 

 

วันนี้มีเรื่องเกี่ยวกับ HPLC 1100 และ HPLC 1200 อีกแล้วค่ะ อย่าเพิ่งเบื่อกันนะ

 

วันนี้เป็นเรื่องเล่าเกี่ยวกับการตั้งค่า Calibration curve จาก software ของเครื่อง

 

เคยมีลูกค้ามาใช้เครื่องแล้วเจอปัญหา ระหว่างการสร้าง Calibration curve

 

ซึ่งเป็นการสร้างกราฟมาตรฐาน จาก โครมาโตแกรมของสารมาตรฐานแต่ละความเข้มข้นที่ฉีดไว้

 

เมื่อสร้างกราฟ Level ที่ 1 (ระดับความเข้มข้น)แล้วจะสร้าง Level อื่นๆต่อ พบว่า

 

ไม่สามารถสร้างกราฟ Level (ระดับความเข้มข้น) ต่อไปได้

 

 ทั้งๆที่มั่นใจแน่นอนว่าคือ พีค หรือ โครมาโตแกรมของสารมาตรฐาน นั้น

 

แนวทางการแก้ไข มีค่ะ ยกตัวอย่าง เช่น

 

โครมาโตแกรมสารมาตรฐาน Level 1 และ 2 ที่เวลา (RT)  2.740 และ 2.712 ตามลำดับ คือสารมาตรฐานเดียวกันแต่ต่างความเข้มข้น

 



นำมาสร้าง Calibration curve จาก software ของเครื่อง
ในระดับความเข้มข้นที่ 1 จะได้ Calibration table มา 1 แถว

 

เมื่อสร้าง Calibration curve ต่อ ในระดับความเข้มข้นที่ 2 ควรจะมี Calibration table จำนวนแถวเพิ่มขึ้นแต่ปรากกว่าไม่ได้

 

 

สาเหตุเกิดจากการกำหนดช่วง window time ของพีค น้อยเกินไป ดังรูป

 

 

แสดง window time (RT- retention time) น้อยเกินไป เมื่อ software ประมวลผลทำให้ไม่สามารถอ่านค่า ณ ช่วงเวลาพีคนั้นไม่เจอ

 

ทำให้ software ไม่เพิ่มระดับความเข้มข้นให้ด้วยเช่นกัน

 

ดังนั้นต้องเพิ่มค่า window time (RT- retention time) ขึ้น

 

ที่ menu เลือก Calibration > Calibration Setting

 

 

ได้หน้าต่าง Calibration Setting ให้ปรับค่าที่ window time ที่กรอบสีแดงดังรูป ปรับเพื่อเพิ่ม / ลด ตามต้องการ

 

 

เมื่อเพิ่ม window time ทำให้ขยายกรอบเวลาเพิ่มขึ้น software จะสามารถอ่านค่าพีคนั้นได้

 

 



แค่นี้เราก็สามารถสร้าง  Calibration curve ต่อ ได้ได้แล้วค่ะ

 

 

 

หมวดหมู่บันทึก: พัฒนางานประจำ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 06 ธันวาคม 2555 16:36 แก้ไข: 07 ธันวาคม 2555 07:18 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 Our Shangri-La, Ico24 ServiceMan, และ 4 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

Ico48
mori [IP: 202.44.135.34]
13 ธันวาคม 2555 00:26
#82491

สวัสดีคะ พี่ DaDa คือว่าน้องเป็นนักศึกษาที่ศิลปากรกำลังทำโปรเจคที่เกี่ยวข้องกับการแยกพีค sucrose glucose และ fructose ซึ่งน้องสามารถแยกพีคของ fructose ได้ชัดเจนแต่น้องไม่สามารถแยกพีค sucrose และ glucose ออกจากกันได้อย่างชัดเจน ซึ่งน้องใช้คอลัมน์ Rezex รุ่น RNM-Carbohydrate Na+ (8%) ของบริษัท Phenomenex ใช้ mobile phase น้ำ flow rate 0.6 ml/min พี่ DaDa คิดว่าน้องควรทำอย่างไรดีคะ จะตอบมาทางเมลล์ก็ได้นะคะ ขอบคุณพี่ DaDa ค่ะ

Ico48
DaDa [IP: 192.168.53.126]
13 ธันวาคม 2555 08:50
#82496

mobile phase และ flow rate เป็นสภาวะที่อ้างอิงจากบริษัท Rezex รุ่น RNM-Carbohydrate Na+ (8%) ของบริษัท Phenomenex ใช่หรือเปล่าค่ะ

ปัจจุบันที่ พี่ใช้แยก น้ำตาลทั้ง สาม ชนิด sucrose glucose และ fructose โดยลำดับการแยกคือ fructose glucose และ sucrose ตามลำดับ

ซึ่งใช้ mobile phase คือ Acetonitrile : Water (75:25)

flow rate 0.5 ml/min

คอลัมน์ APS-2 HYPERSIL 4.6 x 250 mm, 5um บริษัท ฟอร์จูน จาก Thermo

น้องลองใช้สภาวะนี้ดูมั้ยค่ะ แล้วก็ค่อยปรับเปลี่ยนให้เหมาะกับคอลัมน์ของน้องอีกทีนึง

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 3.234.244.18
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ