นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 2683
ความเห็น: 1

แก้ปัญหาหน้างาน…. ตัวการคือคอลัมน์

แก้ปัญหาหน้างาน…. ตัวการคือคอลัมน์

 

 

หลายๆ บันทึกเกี่ยวกับ HPLC ( High Performance Liquid Chromatography) ที่ผ่านมา

DaDa จะเขียนเกี่ยวปัญหา ของผู้ใช้เครื่องซะส่วนใหญ่

คราวนี้ เจอ ปัญหา กับตัวเองบ้าง เลยขอนำมาแชร์ นะ ที่นี่ค่ะ

เรื่องมีอยู่ว่า ช่วง 2 สัปดาห์ที่ผ่าน มีงานทดสอบ HPLC เข้ามา

เป็นการทดสอบแยกสารเพื่อหาปริมาณน้ำตาล Fructose Glucose และ Sucrose ที่มีในตัวอย่าง

สภาวะที่ใช้แยกสารกลุ่มนี้ด้วย HPLC ทางศูนย์เครื่องมือฯมีรองรับอยู่แล้ว

รวมทั้งสาร มาตรฐาน ทั้ง 3 ชนิดที่กล่าวมา

และด้วยลักษณะตัวอย่างไม่ต้องมีการเตรียมหรือสกัดสารสนใจด้วยตัวทำละลายอีก พร้อมฉีดเข้าเครื่องทันที

อย่าช้าอยู่เลย หลังจาก ฝึกน้องใหม่ น้องบายศรี ที่จะเข้ามาเป็นนักวิทยาศาสตร์ ประจำเครื่องนี้อีก 1 คน

ได้ขอความช่วยเหลือ น้องบายศรี ช่วย เตรียม Mobile phase และเตรียมตัวอย่างโดยการเจือจางและกรองตัวอย่าง

ส่วน DaDa ก็เตรียมพร้อมความพร้อมของเครื่อง  และสารมาตรฐานโดย mix ผสมกัน

โดยใช้ Stock standard ที่เตรียมไว้นานแล้วแต่ยังไม่หมดอายุ (ดูจาก ฉลากข้างขวดของสาร)

เนื่องจาก DaDa รู้อยู่แล้วว่าสารทั้ง 3 ชนิด สารตัวไหนจะถูกแยกมาลำดับก่อน-หลัง

เมื่อเครื่องพร้อมฉีด อย่าช้าอยู่เลย Start Run เลย

ผลจากการฉีดสารมาตรฐานและตัวอย่าง พบว่า ไม่เป็นไปตามความต้องการ

ทั้งๆ ที่สภาวะดังกล่าวใช้ฉีดให้บริการ มาหลายงานหลายตัวอย่างแล้ว

 

 

จากรูป  สาร 2 พีค ได้แก่ Fructose และ Glucose ไม่แยกจากกัน

ในขณะที่ Sucrose แยกมามาได้ดี

 

ลูกค้าต้องการทดสอบเชิงปริมาณจะไม่สามารถทำได้ เพราะสารไม่แยกจากกัน

 

เมื่อฉีดสารมาตรฐานแล้วได้ข้อมูลการแยกที่ไม่โอเค 

dada กลับมานั่งคิดทบทวนว่าสาเหตุจะเกิดจากอะไรได้บ้าง

วันนั้น สาเหตุเดียวที่เป็นแรงจูงใจ คือ คาดว่าจะเกิดจาก Stock สารมาตรฐาน ที่เตรียมไว้ (ค่อนข้างนานแล้ว)มีปัญหา

จึงได้ให้ น้องบายศรี ช่วยเตรียมสารมาตรฐานใหม่

แต่ครั้งนี้จะฉีดแยก single standard ของ Fructose และ Glucose 

เพื่อดูว่า ระหว่าง 2 สารดังกล่าว ตัวไหนที่มีปัญหา

 

 

จากรูปพบว่า สารมาตรฐาน Glucose ให้ลักษณะพีคที่ผิดปกติ ไม่เหมือน Fructose

ที่ให้ลักษณะพีคที่ถูกต้อง

 

หรือว่า จะเป็นเพราะ สารมาตรฐาน Glucose มีปัญหา

เอ๊ะ เอ๊ะ !!!!! แต่ เดี๋ยวก่อน

DaDa ลองฉีด ตัวอย่าง ลักษณะพีคที่ Fructose และ Glucose  ก็ได้โครมาโตแกรม ที่ไม่แตกต่างกันกับ สารมาตรฐาน

ครั้งนี้ฉีดทั้ง ตัวอย่าง และ สารมาตรฐาน พบว่ายังคงให้ข้อมูลที่เหมือนเดิม คือสาร 2 พีค ได้แก่ Fructose และ Glucose ไม่แยกจากกัน

 

 

เอ๊ะ หรือ ว่า จะไม่ใช่ เพราะ สารมาตรฐานซะแล้ว

 

DaDa กลับมานั่งหา สันนิษฐานใหม่ ซึ่ง คิดว่าน่าจะเกิดจาก คอลัมน์ หรือเปล่านะ ?

 

คอลัมน์ (Stationary phase) ที่ใช้สำหรับทดสอบน้ำตาล จะเป็นคอลัมน์เฉพาะสำหรับทดสอบเท่านั้น

ไม่สามารถใช้คอลัมน์ ทั่วๆไป เช่น C8, C18 มาทดสอบได้

หากเป็นจริงเช่นนั้น สิ่งที่ต้องทำกับ คอลัมน์ คือ การล้างคอลัมน์

เพื่อ ชะ สิ่งสกปรก ตกค้าง carry over ต่างๆ ที่ติดอยู่ ภายในคอลัมน์ ออกมาให้หมด

 

DaDa ตัดสินใจ ล้างคอลัมน์  24 ชั่วโมง โดยเริ่มล้างด้วย น้ำ HPLC grade 100 % ประมาณ 12 ชั่วโมง

ต่อด้วย 100 %  Acetonitrile ประมาณ 12 ชั่วโมง  

(ข้อมูลนี้ได้จากคู่มือแนะนำการใช้คอลัมน์ค่ะ บวกกับประสบการณ์ที่มีมานิดหน่อย)

หลังจากนั้นจึงเริ่ม set สภาวะการทดสอบใหม่อีกครั้ง พบว่าให้ผลเป็นที่น่าพอใจ

คือสาร 2 พีค ได้แก่ Fructose และ Glucose แยกออกจากกันแล้ว ได้สาร โครมาโตแกรมครบทั้ง 3 พีค

 

 

สามารถทดสอบตัวอย่างต่อได้

 

 

ขอบคุณโอกาส ประสบการณ์ที่ดี ให้ได้เรียนรู้และแก้ไขปัญหาลุล่วงในครั้งนี้

 

ปล. การล้างคอลัมน์ ไม่ได้หมายถึง การนำคอลัมน์ ไปล้างด้วยน้ำเหมือนกับการล้างจานล้างผัก นะค่ะ

แต่หมายถึงการ Flow อัตราการไหลของ น้ำ หรือ ตัวทำละลายที่เหมาะสม ผ่านเข้าสู่คอลัมน์

 เพื่อชะ ทำความสะอาด สิ่งสกปรก ตกค้าง ให้หลุดออกมาจากคอลัมน์ ค่ะ

 

 

 

หมวดหมู่บันทึก: พัฒนางานประจำ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 29 พฤศจิกายน 2555 13:44 แก้ไข: 29 พฤศจิกายน 2555 13:55 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 ServiceMan, Ico24 iHum, และ 3 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

Ico48
ServiceMan (Recent Activities)
29 November 2012 19:38
#82275

น้ำตาลหากินง่ายแต่ทดสอบไม่ง่ายเลยนะ

ว่าก็ว่าเถอะอยากกินน้ำตาลมะพร้าวสด เย็นๆจัง

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 18.207.130.162
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ