นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
ความเคลื่อนไหวล่าสุด
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 9051
ความเห็น: 13

ปัญหาของ HPLC และวิธีการแก้ปัญหาเบื้องต้น ..ตอน ฟองอากาศภายในระบบ HPLC

มีฟองอากาศภายในระบบ HPLC แก้ไขได้หากรู้ ที่มา และ สาเหตุ(ประสบการณ์จริงจากการทำงาน)

 

HPLC : Agilent 1100


ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์

มีฟองอากาศภายในระบบ HPLC แก้ไขได้หากรู้ ที่มา และ สาเหตุ(ประสบการณ์จริงจากการทำงาน)

 มีฟองอากาศภายในระบบ HPLC : การมีอากาศใน Mobile phase สามารถแบ่งออกเป็น 2 ลักษณะคือ การเกิดฟองอากาศใน Mobile phase และการมีอากาศใน Mobile phase โดยไม่เป็นฟอง


2.1. การเกิดฟองอากาศใน Mobile phase : ปัญหาที่เกิดตามมาคือ


- ฟองอากาศจะเป็นสาเหตุให้อัตราการไหลของ Mobile phase ไม่คงที่ทำให้ Retention time และ Peak area ของสารไม่คงที่

- และถ้ามีฟองอากาศใน column จะทำให้ได้ Peak ที่มีลักษณะไม่สมบูรณ์ อาจทำให้ column เสื่อมประสิทธิภาพได้


- และถ้ามีการสะสมของฟองอากาศที่ Detector ก็จะเป็นสาเหตุของการเกิด Noise ของ Baseline

2.2 การมีอากาศใน Mobile phase โดยไม่เป็นฟอง : ปัญหาที่เกิดมาจากการที่ Oxygen ซึ่งละลายอยู่ ทำการ Oxidized ตัวอย่าง หรือสารที่เป็นองค์ประกอบใน Mobile phase หรือ Stationary phase การที่มี Oxygen ละลายอยู่ใน Mobile phase ในปริมาณมาก


- จะทำให้ Sensitivity ของ Fluorescence detector ลดลง
 

- และเป็นสาเหตุของการเกิด Noise และทำให้ Baseline ไม่เรียบของ UV-detector ในบาง condition

 

-  และผลกระทบของ Oxygen ต่อ RID detector ก็คือการมีลักษณะเป็นคลื่นของ baseline

จุดเกิดเหตุ


1. Glass filter solvent inlet
: ซึ่งจะอยู่ในขวด mobile phase เป็นส่วนที่สัมผัส mobile phase โดยตรง เป็นส่วนที่ทำหน้าที่กรอง ดักจับ สิ่งสกปรกที่อยู่ใน mobile phase หาก Glass filter solvent inlet สกปรกจะทำให้ขณะที่มีการให้อัตราการไหล ของ mobile phase เป็นฟองอากาศ


แก้ไข -  สังเกต ที่ Glass filter solvent inlet ว่าสกปรกหรือไม่ หากสกปรกให้ถอดออกมา แล้วทำความสะอาด โดยการช้างด้วยกรดไนตริกเข้มข้น ทิ้งไว้ข้ามคืน แล้วล้างด้วยน้ำกลั่น ทิ้งไว้ข้ามคืน จะได้ Glass filter solvent inlet ที่สะอาดพร้อมใช้งาน

 

   -  หรือจัดทำแผนการบำรุงรักษา Glass filter solvent inlet ทุกๆ 3-6 เดือน ครั้ง
 


2. Purge valve : สามารถสังเกตุได้จากสาย waste ว่ามีฟองอากาศหรือไม่หากมองไม่เห็นสามารถดูได้จาก online plot ส่วนของสัญญาณ pressure จะมีสัญญาณที่ไม่คงที่เป็นแบบฟันปลา

สาเหตุ : เกิดจาก frit ที่ Purge vavle สกปรก  
        แก้ไข  : ดูว่า frit ที่ purge valve สกปรกหรือไม่ หากสกปรกต้องเปลี่ยนอันใหม่

 

.............. ผู้ปฏิบัติงาน หากมีปัญหาดังกล่าว ลองนำไปปฏิบัติดูนะคะ.. ...

 

หมวดหมู่บันทึก: บริการวิชาการ
สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ Copyright
สร้าง: 30 พฤศจิกายน 2550 18:33 แก้ไข: 28 กุมภาพันธ์ 2551 11:03 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

อืมเป็นอีกปัญหาหนึ่งของ HPLC ที่ต้องใช้ประสบการณ์และความชำนาญ ในการแก้ปัญหาครับ
Ico48
canon [IP: 161.200.255.162]
15 ธันวาคม 2550 17:34
#4798

ไม่ทราบว่า glass filter solvent inlet คืออะไรคะ ออกตัวว่าไม่มีความรู้ด้าน HPLC นี้นัก แต่ต้องใช้ในงานวิจัยค่ะ

Inlet line ที่ใช้อยู่จะต่อจากหัว  suction โลหะ เป็นรูพรุนละเอียดๆ ไม่มี glass filter solvent inlet ค่ะ เวลาทำความสะอาดก็เอาไปเข้า ultrasonic ค่ะ แบบนี้ใช้ได้ไม๊คะ

ตอบคุณ canon

 สำหรับ

glass filter solvent inlet พูดถึง HPLC : Agilent 1100

 ในกรณีที่เป็นโลหะ เป็นรูพรุน น่าจะเป็นของ Water หรือเปล่าค่ะ (ไม่แน่ใจ) ซึ่งเวลาทำความสะอาดแบบวิธี

ที่คุณ canon ปฏิบัติอยู่ ก็ถูกต้องแล้วค่ะ

..................................................................... 

 

Ico48
canon [IP: 161.200.255.162]
20 ธันวาคม 2550 18:04
#5928

ขอบคุณค่ะ :D

mobile phase ที่ใช้อยู่ป็นน้ำค่ะ แต่เห็นคนอื่นที่เค้าใช้ mobile phase เป็น methanol หรือ acetonitrile ก็ใช้หัว suction โลหะอันเดียวกันเนี่ยแหละค่ะ

 ขอถามอีกนะคะ

1.หากฟองอาศเข้าไปในคอลัมน์ จะไล่ออกได้ยังไงคะ

2. หาก base line เรียบ แต่ไม่ขนานกับพื้นโลก (มี solpe) เกิดจากอะไรค่ะ (ขณะใส่คอลัมน์อยู่) กำลังประสบปัญหาอยู่ค่ะ ล้างคอลัมน์มา 2 Wk แล้วยังไม่หายค่ะ

ตอบคุณ canon

1. แนะนำ การทำความสะอาด ส่วนที่เป็นโลหะ (ส่วนที่คล้ายกับ glass filter solvent inlet)ให้ sonicate ใน ultrasonicbath ด้วย methanol นะคะ

2. หากฟองอากาศเข้า คอลัมน์ ทางเดียวที่จะเอาออกได้ คือการ ให้อัตราการไหล เข้า คอลัมน์ไปเรื่อยๆ จนแน่ใจว่า ฟองอากาศน่าจะออกมาหมดแล้ว แต่ แนะนำว่า ควรจะกำจัดฟองอากาศ (ไล่ฟองอากาศ) ที่มีอยู่ในระบบ HPLC ก่อนทุกครั้งที่จะ้เริ่มต่อ คอลัมน์ เพื่อป้องกันไม่ให้ฟองอากาศเข้าสู่ คอลัมน์

3. baseline เรียบแต่ไม่ขนานกับพื้นโลก คิดว่าน่าจะเป็นส่วนใดส่วนหนึ่งของ HPLC สกปรก คาดว่าน่าจะเป็น ส่วนของ flow cell ของ detector ลองทำความาสะอาด flow cell ดูนะคะ โดยการ ให้อัตราการไหล ของ น้ำ เข้าไปในระบบ (อัตราการไหล ไม่สูงมากนัก 0.5-1 ml/min)ทิ้งไว้ประมาณ 1-2 ชั่วโมง หรือ มากกว่านั้น

 

Ico48
noon [IP: 158.108.150.241]
16 กุมภาพันธ์ 2556 21:36
#84258

เมื่อmobile phase ใกล้หมด เราควรเติมอย่างไรดีคะ่ คือใช้mobile phase 2 ตัวคะ เป็นน้ำ และ อะซิโตนไนท์ไตรท์ สัดส่วน 50:50คะ

อยากทราบว่าเราควรลด flow rate ลงจนเหลือศูนย์ แล้วค่อยเปลี่ยนขวดน้ำmobile phase ใหม่ใช่ไหมคะ? แล้วถ้าเราค่อยๆเติมน้ำmobile phase ผ่านกรวยลงไปในขวดmobile phase เดิมได้หรือเปล่าคะ เพราะไม่อยากหยุดฉีดและลด-เพิ่ม flow rateใหม่อ่ะคะ

ช่วยตอบหน่อยนะคะ ขอบคุณคะ

Ico48
DaDa [IP: 192.168.53.127]
18 กุมภาพันธ์ 2556 08:12
#84280

ค่อยๆเติมน้ำmobile phase ผ่านลงไปในขวดmobile phase เดิม ได้เลยค่ะ

Ico48
Benjawan [IP: 49.230.103.162]
21 พฤษภาคม 2558 15:26
#103087

เกิดปัญหาHPLC ค่ะ 1.อยากทราบว่า RT ของStd.กับRTของตัวอย่างไม่ตรงกันเกิดจากสาเหตุอะไรคะ

2.baselineไม่เรียบทั้งStd.และตัวอย่างเกิดจากสาเหตุอะไรคะเมื่ออ่านจากคอมเม้นข้างบนแล้วมีการแก้ไขปัญหาแล้วยังไม่หาย ต้องทำอย่างไรต่อไปคะ รบกวนช่วยหน่อยนะคะ

Ico48
DaDa [IP: 192.168.53.71]
22 พฤษภาคม 2558 16:53
#103095

RT ของ Std.กับ RTของตัวอย่างไม่ตรงกันอาจจะเกิดจาก

1. ตัวทำละลาย Std. กับ ตัวทำละลายตัวอย่าง ไม่เหมือนกัน

2. เกิดจาก Matrix ของตัวอย่างเอง ส่งผลให้ RT ไม่ตรงกัน

หากต้องการยืนยันว่าเป็นสารตัวเดียวกัน ลองวิธี spiked ค่ะ

Ico48
DaDa [IP: 192.168.53.71]
22 พฤษภาคม 2558 16:57
#103096

baselineไม่เรียบทั้งStd.และตัวอย่างเกิดจากสาเหตุอะไร

1. เกิดจากฟองอากาศข้างต้น

2. เกิดจาก condition ไม่เหมาะสม

3. เกิดจาก คอลัมน์

4. เกิดจาก flow cell ของ detector สกปรก ต้อง flow ล้างเพื่อทำความสะอาด

Ico48
Benjawan [IP: 49.230.163.35]
23 พฤษภาคม 2558 12:10
#103102

ขอบคุณค่ะ

แต่ว่าปันหาข้างต้นได้ทำการตรวจสอบแร้ว

1.ฟองอากาศทำการดูดไล่จนแน่ใจแร้วค่ะว่าไม่น่าใช่ปัญหา

2.condition น่าจะเหมาะสมค่ะเพราะsale engineer มาทำการ เซ็ตให้

3.ส่วนคอลัมน์เพิ่งซื้อมาใหม่แกะกล่องเรยค่ะ

4.ส่วนflow cellของdetector. ขอวิธีการล้างให้สะอาดควรทำอย่างไรค่ะ

ขอบคุณมากค่ะ

Ico48
muay [IP: 182.52.112.40]
04 กุมภาพันธ์ 2560 21:20
#105878

วัด mix std solution ของน้ำตาลคะ

ปัญหาคือ พีคโครมาโทแกรม มี tail โผล่ทุกพีค เกิดจากสาเหตุอะไรบ้างอะคะ ขอบคุณมากค่ะ

Ico48
Pui [IP: 223.24.144.89]
21 สิงหาคม 2561 10:03
#108203

โมบายเฟส มีสารไม่เต็มสาย มีวิธีการเติมสารให้เต็มสารได้อย่างไรบ้างคะ

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 54.196.190.32
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ