เชิญชวนร่วมเขียนเรื่องราวความสุขของท่าน ผ่าน Share.psu.ac.th โดยใส่คำสำคัญ PSU.QWL

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
Network
Members · Following: 0 · Followed: 4

อ่าน: 11186
ความเห็น: 7

Column- HPLC (1)

ประสิทธิภาพคอลัมน์ พิจารณาได้อย่างไร

 

 

 ที่มาของรูป http://www.analytical-sales.com/column%20mix.jpg

ปัจจุบันเป็นที่รู้จักกันดีว่า เทคนิค HPLC (High Performance Liquid Chromatography) ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิเคราะห์หาปริมาณสารต่างๆ ทั้งทางด้านเภสัชกรรม และอื่นๆ ซึ่งอุปกรณ์ส่วนที่สำคัญชิ้นหนึ่งก็คือ คอลัมน์ (column) ซึ่งคอลัมน์ที่ดีมีประสิทธิภาพเหมาะสม จะช่วยให้ผลการวิเคราะห์ดี สามารถแยกและหาปริมาณสารที่ต้องการได้อย่างถูกต้อง

ประสิทธิภาพคอลัมน์ พิจารณาได้อย่างไร

สิ่งแรกที่เราจำเป็นจะต้องรู้ คือ การพิจารณาประสิทธิภาพของคอลัมน์นั้นพิจารณาได้อย่างไร โดยทั่วไปการพิจารณาประสิทธิภาพของคอลัมน์นั้นพิจารณาได้จากเกณฑ์ของค่าพารามิเตอร์ต่างๆ ได้แก่


void volume,


theoritical plate (N > 2000),


capacity factor (k' > 2),


tailing factor (T < 2 ),


resolution (Rs > 2)


โดยค่าพารามิเตอร์เหล่านี้คำนวณได้จาก chromatogram ของการฉีดสารตัวอย่าง
 

พารามิเตอร์แต่ละตัวหมายถึงอะไรและ บอกอะไรเราได้บ้าง

พารามิเตอร์ค่าแรกที่จะกล่าวถึงก็คือ
void volume คือ ปริมาตรช่องว่างในคอลัมน์ที่ทำให้คอลัมน์ไม่สามารถจับสาร (retain) ไว้ได้ ซึ่งสามารถหาได้ง่ายๆ จากการฉีดสารที่มีโมเลกุลขนาดเล็ก
(เช่น uracil) โดยสารนี้จะไม่ถูก retain ไว้ในคอลัมน์สามารถผ่านออกมาพร้อมกับ mobile phase ได้ เมื่อเราได้ retention time (void time) ของ peak ดังกล่าวแล้ว เมื่อนำไปคูณกับ flow rate ที่ใช้ ก็จะได้เป็นค่า void volume ซึ่งจะมีความสำคัญในการคำนวณค่าพารามิเตอร์อื่นๆ ต่อไป


Capacity factor (k') เป็นค่าที่บอกความสามารถในการ retain สารที่จะวิเคราะห์ไว้ในคอลัมน์ ซึ่งค่านี้จะต้องใช้ void time ในการคำนวณ

โดยที่

 

tR   =  เวลาของสาร
t0= เวลาของตัวทำละลายที่ไม่ถูกหน่วงในคอลัมน์

 

Resolution(Rs) เป็นค่าพารามิเตอร์ที่ใช้บอกความสามารถในการแยก peak ออกจากกัน เนื่องจากในการวิเคราะห์ปริมาณตัวยา หากมี peak ที่ต้องการเชื่อมรวมกับ peak อื่น พื้นที่ของ peak ก็จะไม่ชัดเจนทำให้การคำนวณปริมาณผิดพลาด 


 

 โดยที่

 

R =  ค่าการแยก

tRA   =  เวลาของสาร A

tRB   =  เวลาของสาร B

WA       =  ความกว้างของฐานพีก A

WB       =  ความกว้างของฐานพีก B

W1/2A=ความกว้างของฐานพีกAที่ครึ่งหนึ่งของความสูง

W1/2B=ความกว้างของฐานพีกBที่ครึ่งหนึ่งของความสูง

 

Tailing factor เป็นค่าที่บอกลักษณะของ peak และจะมีค่าสูงเมื่อคอลัมน์เริ่มเสื่อมคุณภาพ

 

พารามิเตอร์ที่สำคัญตัวสุดท้ายที่จะกล่าวถึงก็คือ

theoriticalplate(N) เป็นค่าที่ใช้ในการบอกประสิทธิภาพของคอลัมน์ โดยจะขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของสารตัวอย่าง และสภาวะที่ใช้ในการวิเคราะห์ เช่น mobile phase, flow rate, อุณหภูมิ, คุณภาพ และการบรรจุของ packing material

 

 

 

tR   =  เวลาของสาร
WB    =  ความกว้างของฐานพีก

W1/2=ความกว้างของฐานพีกที่ครึ่งหนึ่งของความสูง

 

 

 

 

หมวดหมู่บันทึก: บริการวิชาการ
สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ Copyright
สร้าง: 04 พฤษภาคม 2552 12:00 แก้ไข: 04 พฤษภาคม 2552 12:07 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

Ico48
auhoo [IP: 158.108.43.20]
06 กันยายน 2552 18:43
#48061

เราจะรู้ได้อย่างไรคะ ว่าสารที่ต้องการวิเคราะห์นั้น จะต้องใช้คอลัมม์แบบไหนรุ่นไหน มีวิธีเลือกอย่างไรให้เหมาะกับสารนั้นๆคะ

ปล.ช่วยตอบกลับมาทาง e-mail ให้หน่อยค่ะ อยากทราบข้อมูลด่วน ขอบคุณล่วงหน้าค่ะ

Ico48
นายอับดุลเลาะ มะลี [IP: 192.168.128.10]
03 ธันวาคม 2552 09:32
#51631

พี่คับ ช่วยบอกรายละเอียดเกี่ยวกับความเหมือนและความแตกต่างของ GC กับ HPLC ทีคับ ส่งรายละเอียดมาทางเมล์ก้อได้คับ          

                                                         

อ่านข้อมูลได้ที่นี่

http://share.psu.ac.th/blog/science-equipment/14704

 

 

Ico48
oom [IP: 61.7.145.12]
21 เมษายน 2553 15:16
#56411
อยากทราบวิธีการวิเคราะห์น้ำตาลค่ะ

ที่ใช้อยู่ ดังนี้ค่ะ

อาจมีการปรับเปลี่ยนสัดส่วนของ

ACN: water ได้ตามความเหมาะสม

 

Ico48
KLooy THai(ขลุ่ยไทย) [IP: 58.137.99.77]
09 พฤศจิกายน 2553 10:48
#61455
Thank you.

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 54.91.191.48
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ