นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

ใยมะพร้าวน้องใยไหม
Ico64
พิสิฐ์พงษ์ หมื่นประเสริฐดี
นักวิทยาศาสตร์
คณะวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 6 · ผู้ติดตาม: 10

อ่าน: 2420
ความเห็น: 3

แก้ปัญหา HPLC: Negative Peak ใน Diode Array Detector

     วันนี้มีนักศึกษา ป.โท ต่างชาติ ใช้เครื่อง HPLC และปัญหาพีคหัวคว่ำ หรือ โกท์สพีค หรือ พีคติดลบ (Negative Peak) ซึ่งปัญหานี้ อาจเจอได้ในการวิเคราะห์ตัวอย่างหรือสารมาตรฐาน (สารมาตรฐานมักไม่ค่อยเจอ) ด้วยเครื่อง HPLC ซึ่งแสดงให้เข้าใจมากขึ้น ดังภาพนี้

 

       กรณีที่เกิด Negative Peak ขึ้นมา มีได้หลายสาเหตุ แต่สาเหตุพื้นฐานบ่อยที่สุด คือ การตั้งค่า Wavelength ที่ไม่ถูกต้อง โดยเฉพาะการเซ็ตค่า Reference ไม่เหมาะสม ซึ่งโปรแกรม HP Chem หรือ Intrument 1 Online ของเครื่อง HPLC ยี่ห้อง Agilent จะสามารถแก้ได้ในหน้า DAD Signals ของการ Edit method

 

 

       จากรูปนี้ เห็นว่า หากเราตั้งค่าความยาวคลื่นไว้ที่ 280 nm และตั้ง Reference ไว้ที่ 400 nm BandWidth 100 nm แล้วเกิด Negative Peak ขึ้นมา ก็วิเคราะห์ได้เบื้องต้นว่า สารที่พีคหัวคว่ำนั้น ไม่ได้ดูดกลืนแสงที่ 280 nm แต่ดันไปดูดกลืนแสงช่วง 400 nm แทน ดังนั้น จึงถูกเครื่องคำนวณให้หักลบค่าในช่วงที่ตั้งค่า Reference ไว้

 

     ดังนั้น ก็แก้ไขได้ตามลำดับ เช่น เริ่มจากย้ายช่วง Reference ออกไปช่วงอื่น หากยังไม่สำเร็จ ก็อาจกด Off ไปได้เลย แต่ Noise อาจเกิดขึ้นมาเยอะสักหน่อย แต่หากพีคยังคว่ำอยู่ แปลว่าสารนั้นๆ ไม่ได้ดูดกลืนแสงช่วง 280 nm จริงๆ หากเป็นสารมาตรฐาน ก็อาจเกิดจากการจำค่าผิด ให้หาข้อมูลของสารมาตรฐานใหม่อีกครั้ง ซึ่งอาจเป็นค่าที่อยู่ในช่วง Reference ก็เป็นได้

 

      แต่หากพีคหัวคว่ำนั้นไม่ใช่สารมาตรฐาน และไม่ได้รบกวนกับสารที่เราต้องการหาแล้ว และหากการเปลี่ยนค่าความยาวคลื่นมีผลต่อการวิเคราะห์สาร Analyste ก็ไม่ต้องไปแก้ไขอะไรมันก็ได้ครับ อิอิ

 

    นอกจากนี้ พีคหัวคว่ำ ยังอาจเกิดจากสาเหตุอื่นๆ ซึ่งเป็นไปได้น้อย เช่น ฟองอากาศ การใช้โมบายเฟสรูปแบบ gradient ระบบอิเล็กทรอนิกส์ขัดข้อง หรือ การใส่ Flow cell ผิดด้าน เป็นต้น

 

เอิ้ก เอิ้ก

 

"ใจสั่งมา"

หมวดหมู่บันทึก: พัฒนางานประจำ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 15 มกราคม 2558 22:49 แก้ไข: 15 มกราคม 2558 22:56 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 คนธรรมดา, Ico24 ทดแทน, และ 2 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

Ico48
พัทรพร [IP: 125.27.21.193]
26 สิงหาคม 2559 14:04
#105503

ถ้าไม่ได้เกิดจากการตั้งค่า แต่เกิดจาก columns แห้งเพราะไม่ได้ใช้นานแล้วไม่ได้ถอด columns ออกมาเก็บ แก้ไขยังไงได้บ้างค่ะ Negative peak ขึ้นช่วงที่ต้องการอ่านค่าพอดีค่ะ

คุณพัทรพร

        ถ้าต้องการแก้ไขคอลัมน์แห้ง ก็ Flow ด้วยโมบายเฟส หรือ น้ำ DI อัตราสัก 1 มล./นาที ไปก่อนสัก 1 วันครับ แล้วพิจารณาว่าคอลัมน์ Equilibrium รึยัง แล้วลองฉีดสารตัวอย่างหรือสารมาตรฐานใหม่ครับ

 เอิ้ก เอิ้ก

 

"ใจสั่งมา"

Ico48
พัทรพร [IP: 125.27.17.120]
29 สิงหาคม 2559 11:58
#105511

ลองทำตามที่แนะนำดูแล้วนะค่ะ แต่ยังไม่ได้ผลเลยค่ะ ยังมี Negative peak ขึ้นตำแหน่งเดิมค่ะ ต้องแก้ไขยังไงต่อไปค่ะ T_T ???

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 3.233.217.242
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ